кДНК - ГИБРИДИЗАЦИЯ (cDNA hybridization) - метод обнаружения нуклеиновых кислот с помощью гибридизационных зондов. Химической основой метода является соединение искомой нуклеиновой кислоты с меченым зондом через комплементарные ДНК-ДНК участки; исход их взаимодействия учитывается по появлению метки (обычно радиоизотопной) в составе образовавшегося комплекса. Постановка кДНК - гибридизации предполагает:

1. экстракцию и денатурирование нуклеиновой кислоты;
2. инкубацию ее в растворе с избытком молекул зонда в режимах, специально подобранных для каждой конкретной гибридизации (в конечном счете они определяются степенью комплементарности реагирующих участков);
3. отмывание комплекса от несвязавшихся молекул зонда; и
4. учет результатов по интенсивности сигнала, поступающего от метки в составе комплекса. Чаще всего применяют т. н. точечную (dot-blot) гибридизацию на мембранных фильтрах.

В работе с вирусами гепатитов кДНК-гибридизация позволяет обнаруживать частицы, содержащие полномерную нуклеиновую кислоту или ее фрагменты с последовательностями, комплементарными имеющимся зондам. Чувствительность ее, как правило, на 1—2 порядка выше, чем у твердофазных серологических тестов. В качестве примера можно указать на успешное применение данного метода для обнаружения частиц Дейна в крови и биоптатах печени при подозрении на инфекцию гепатита В или поиск вируса гепатита А в экскретах больного и объектах внешней среды. кДНК — гибридизация является одним из основных методов в работах по генной инженерии . С ее помощью, в частности, осуществляется отбор клонов микроорганизмов, несущих встроенные нуклеотидные последовательности.

Возврат на главную страницу.

Возврат в КУНСТКАМЕРУ.